近年来，基因编辑技术的迅速发展为生命科学研究带来了革命性的变革，尤其是CRISPR-Cas13 RNA靶向系统在基础及应用科学中得到了广泛运用，成为科研人员的重要工具。然而，在哺乳动物细胞和小鼠模型中，旁切效应的出现，以及体内靶向能力和效率的不稳定性仍然限制了其广泛应用。为此，我们与您分享来自西班牙安达卢西亚发育生物学中心等研究团队于2025年3月16日在Nature Communications（IF=166）上发表的新研究成果。

该研究提供了一整套经过优化和验证的策略工具箱，利用瞬时方法优化了斑马鱼中RNA靶向的CRISPR-Cas技术，显著提升了在斑马鱼中进行高效、特异及安全的RNA靶向研究的潜力，这为CRISPR-Cas技术的体内应用提供了新思路和方法，并为更广阔的潜在治疗铺平了道路。

研究亮点

本研究提出了五种互补的斑马鱼RNA靶向CRISPR-Cas技术优化策略，包括化学修饰gRNA（cm-gRNA）、核定位信号（NLS）组合优化、体外转录gRNA毒性筛查、RNA靶向模型预测以及替代系统的应用。通过斑马鱼胚胎模型，评估并优化RNA靶向的CRISPR-Cas技术，同时解决了基因靶向效率低、毒性问题、核RNA靶向困难等一系列在实际应用中面临的挑战。

研究背景

RfxCas13d是源自黄化瘤胃球菌XPD3002的一种II类/VI型CRISPR-Cas RNA内切酶，具备强大的RNA靶向能力。研究团队通过优化核糖核蛋白（RNP）复合物和mRNA-gRNA递送技术，使CRISPR-RfxCas13d能够在斑马鱼胚胎中实现有效、瞬时的mRNA敲降。这一系列策略不仅扩展了该技术在体内应用的范围，也为进一步的研究和开发奠定了重要基础。

研究成果

本研究的实验结果展示了CRISPR-RfxCas13d在斑马鱼胚胎中的优越表现，尤其在诱导靶向内源性mRNA的安全性和效率方面表现出色。利用优化的mRNA-gRNA系统，我们成功克服了以往技术中的局限，为未来的生物医学研究提供了强有力的工具。

总结

本研究通过多种优化策略显著增强了CRISPR-Cas13d，尤其是RfxCas13d在斑马鱼胚胎模型中进行瞬时RNA靶向的效率及安全性。同时，我们揭示了CRISPR-RfxCas13d的附带活性在实际应用中表现优异，几乎没有生理上的不良影响，为探索更低附带活性的替代方案提供了实用指导。

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